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真空离心浓缩仪在寡核苷酸合成中的应用-杭州泡芙短视频科技有限公司




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    真空离心浓缩仪在寡核苷酸合成中的应用

     更新时间:2026-06-26 点击量:56

    真空离心浓缩仪在寡核苷酸合成(Oligo Synthesis)中扮演着至关重要的角色,是连接“合成"与“纯化"的关键环节。

    寡核苷酸合成(固相亚磷酰胺法)是一个多步循环过程,每一步都涉及化学试剂的添加、反应和洗涤。合成的最终产物通常存在于含高浓度氨水、有机溶剂(如乙腈)或缓冲盐的溶液中。在进入纯化(如HPLC、PAGE、LC-MS)和后续应用(如PCR、基因组装、药物递送研究)之前,必须:


    1、去除高浓度氨水

    脱保护副产物和溶剂,未除尽的氨水会干扰后续的纯化分离和质谱检测。

    2、移除有机溶剂

    残留的乙腈等有机相会影响色谱柱分离效果和质谱离子化效率,导致信号抑制或峰形异常。

    3、浓缩样品

    合成后的粗品溶液体积通常较大(数毫升),需浓缩至小体积(微升级)以适应纯化仪器的上样量(如HPLC进样环体积,通常为50-500 μL)。

    传统方法(如氮气吹扫、旋转蒸发)存在处理通量低、易暴沸导致样品飞溅、或高温导致长链Oligo(>50mer)断裂降解的缺陷。而真空离心浓缩仪通过结合 离心力、真空和可控加热,能很好地解决这些问题。

    离心浓缩技术的优势

    真空离心浓缩仪在寡核苷酸合成中的核心优势,在于它能够以温和、高效且无交叉污染的方式,完成从粗产物到纯化前样品的关键过渡。它利用真空环境显著降低氨水和有机溶剂的沸点,从而在低温(通常低于40℃)条件下快速蒸发溶剂,这很好地保护了对热敏感的寡核苷酸(特别是长链和带有荧光标记的序列)免受降解。同时,其高通量设计能兼容96孔板或离心管,一次运行即可处理数十至数百个样品,大幅提升了从合成到纯化的整体通量。更重要的是,运行过程中离心力确保样品始终安稳地沉积于管底,有效防止了溶剂暴沸引发的样品飞溅和交叉污染,为后续获得高纯度的寡核苷酸产品提供了坚实保障。

    1、温和浓缩

    在真空环境下,氨水和乙腈/水共沸物的沸点大幅降低,可在室温至40℃的低温环境下快速蒸发溶剂,保护对热敏感的合成产物(特别是带有荧光标记或磷酸化修饰的Oligo),防止其降解。

    2、高通量处理

    适配96孔板或384孔板,可在单次运行中浓缩成百上千个样品,大幅提升合成与纯化的通量。

    3、防交叉污染

    离心力使样品始终沉积于管底,溶剂蒸汽被冷阱捕获,有效防止了暴沸导致的样品交叉污染。

    4、兼容性强

    可轻松处理含有机溶剂(乙腈、氨水)和水相的混合溶液。

    应用流程

    在寡核苷酸固相合成与氨水脱保护完成后,首先将含有目标产物、氨水及有机溶剂的粗品溶液转移至真空离心浓缩仪专用的离心管或96孔板中;随后,设备在真空环境下通过温和加热(通常低于40℃)快速蒸发去除体系中的氨水和乙腈等挥发性溶剂,使样品浓缩至微升级体积;浓缩后的样品即可直接用于HPLC或PAGE进行纯化分离;最后,将纯化后收集的目标产物馏分再次置于浓缩仪中,去除含水流动相,以获得干燥的寡核苷酸粉末或高浓度溶液,用于后续定量、质检及下游生物学应用。

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    1、合成与脱保护

    合成完成后,用氨水将寡核苷酸从CPG载体上切割下来,同时脱除碱基保护基。

    2、初次浓缩

    将粗产物溶液置于真空离心浓缩仪中,去除大部分氨水和有机溶剂。

    3、纯化

    浓缩后的样品即可用于HPLC或PAGE进行纯化。

    4、二次浓缩

    纯化后的收集馏分(含目标Oligo的水溶液)再次进行离心浓缩,去除流动相,得到干燥的寡核苷酸粉末或高浓度溶液,用于后续冻干或直接使用。

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